支原體被稱為細胞培養(yǎng)中的“隱形對手"，它不會立刻讓培養(yǎng)液渾濁，也不會使細胞大片脫落，卻能在不知不覺中改變細胞的“性格"。下面用通俗的語言，總結(jié)一支原體污染后最常見的表現(xiàn)，方便大家快速識別。

1.       生長變慢
倍增時間延長30–50 %，傳代后兩三天仍達不到預(yù)期密度，好像細胞“罷工"一樣。

2.       形態(tài)“走樣"
貼壁細胞拉絲、邊緣毛糙，出現(xiàn)圓縮；懸浮細胞容易聚成小團，單分散性下降。

3.       代謝異常
同樣接種量，培養(yǎng)液pH下降更快，顏色迅速變黃，但細胞數(shù)并未增加，提示“空轉(zhuǎn)"產(chǎn)酸。

4.       貼壁力下降
輕輕晃動培養(yǎng)皿，細胞成片脫落；胰酶消化時間明顯縮短，提示細胞附著力減弱。

5.       轉(zhuǎn)染效率驟降
外源質(zhì)粒或病毒載體產(chǎn)量突然降低，報告基因表達量下滑，重復(fù)實驗仍不穩(wěn)定。

6.       蛋白分泌“失真"
Western Blot或ELISA發(fā)現(xiàn)目標蛋白條帶弱、背景高，甚至伴隨非特異條帶增多。

7.       細胞周期偏移
流式檢測顯示G0/G1比例升高，S期減少，仿佛細胞被“按了暫停鍵"。

8.       背景熒光增強
熒光顯微鏡下，細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)細小亮點或絲狀信號，染色后更易觀察。

9.       凍存復(fù)蘇率降低
污染細胞凍存后再復(fù)蘇，活率明顯低于同期對照，恢復(fù)緩慢。

10.   交叉“感染"
同培養(yǎng)箱其他細胞系也出現(xiàn)類似狀態(tài)，提示污染源可能已擴散。

如何進一步確認？

·         取培養(yǎng)上清做快速PCR檢測，30分鐘即可給出結(jié)果；

·         或使用熒光染色，高倍鏡下查看細胞周緣是否有微小亮點；

·         定期把“盲樣"送檢，保持監(jiān)測記錄，形成實驗室標準流程。

一句話：當細胞“狀態(tài)莫名下滑"，別忘了把支原體列入排查清單。及時發(fā)現(xiàn)、立即處理，才能讓培養(yǎng)回到正軌。祝大家的細胞都健康、實驗順利！