支原體（mycoplasma）是一類沒有細(xì)胞壁、高度多形性、能通過濾菌器、可用人工培養(yǎng)基部分培養(yǎng)增殖的，原核細(xì)胞型微生物。支原體也是造成生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中，細(xì)胞污染的“主力選手"之一。

在普通光學(xué)顯微鏡下，幾乎看不到支原體的身影，因此如果細(xì)胞被支原體污染，前期很難被發(fā)現(xiàn)，而支原體污染，又會(huì)對(duì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，包括但不限于以下幾點(diǎn)：

1、支原體感染細(xì)胞株會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞失去正常生長(zhǎng)和功能，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。它可以導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)的改變、細(xì)胞增殖的異常以及細(xì)胞功能的異常。

2、支原體在細(xì)胞培養(yǎng)中傳播非常迅速，很容易通過細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞懸液、細(xì)胞培養(yǎng)用具等途徑傳播到其他細(xì)胞培養(yǎng)中，進(jìn)一步污染更多的細(xì)胞株。

3、支原體感染可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的誤解，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)結(jié)果中的觀察結(jié)果可能不再是由所研究的細(xì)胞本身導(dǎo)致的，而是由支原體感染導(dǎo)致的變化。

因此，要通過有效、安全、高效的手段，預(yù)防/清除支原體污染。關(guān)于與支原體的“大戰(zhàn)"，我們總結(jié)了以下幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，希望本期“支原體清除計(jì)劃"可以為大家的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)帶來幫助。

Round 1：實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的清潔

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，需要在嚴(yán)格無菌的環(huán)境下進(jìn)行。因此，維持實(shí)驗(yàn)室的無菌環(huán)境十分重要。實(shí)驗(yàn)環(huán)境包括實(shí)驗(yàn)空間、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的儀器設(shè)備、實(shí)驗(yàn)人員。

可采用甲醛高錳酸鉀熏蒸消毒的方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部空間進(jìn)行消毒，消毒期間需人員撤離，密閉消毒空間24h以上，該方法雖然能有效對(duì)實(shí)驗(yàn)空間進(jìn)行清潔消毒，但甲醛有刺激氣味，對(duì)人和細(xì)胞都有毒性作用。細(xì)胞間1-2周無法使用，因此更推薦用紫外線燈進(jìn)行照射滅菌。在每次實(shí)驗(yàn)開始前，打開紫外線燈，設(shè)置好安全標(biāo)識(shí)，照射實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部空間30分鐘以上，也能達(dá)到不錯(cuò)的滅菌效果。

對(duì)于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的儀器設(shè)備，可采用消毒液、75%酒精擦拭等方法進(jìn)行消毒。該方法中所使用的消毒試劑，多數(shù)也都有揮發(fā)性，對(duì)操作人員有毒性作用，且對(duì)部分微生物無效。

因此，推薦使用更為專業(yè)的微生物祛除試劑：Mycoplasma-off支原體祛除噴霧劑（即用型），含有支原體殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。，并且對(duì)絕大部分真菌細(xì)菌甚至是病毒都有效。

使用起來便捷高效，將Mycoplasma-Off®均勻噴于待消毒的潔凈臺(tái)或?qū)嶒?yàn)設(shè)備和器材的表面，等待5-10分鐘，可用用干燥紙巾將已噴過Mycoplasma-Off®的潔凈臺(tái)或?qū)嶒?yàn)設(shè)備和器材的表面搽拭干凈即可。

培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋這類衛(wèi)生死角，也應(yīng)做好支原體預(yù)防工作，定期更換無菌水，添加用于水槽的支原體清除試劑：Water Shield™  。

實(shí)驗(yàn)人員在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)開始前，也應(yīng)做好相應(yīng)的消毒防護(hù)。使用適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備，如手套、口罩和防護(hù)服等；以及遵循良好的實(shí)驗(yàn)室操作，如避免不同來源的培養(yǎng)物之間的接觸；在實(shí)驗(yàn)過程中，嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室中物品擺放準(zhǔn)則，以培養(yǎng)箱舉例：培養(yǎng)皿擺放密度應(yīng)合理，宜少不宜多等。

Round 2：選擇高品質(zhì)的實(shí)驗(yàn)試劑

實(shí)驗(yàn)試劑也是細(xì)胞支原體污染的來源之一，選擇合規(guī)的、高品質(zhì)的實(shí)驗(yàn)試劑也是預(yù)防支原體污染的關(guān)鍵點(diǎn)之一。

胎牛血清作為細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中重要的添加成分，含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無機(jī)物等，其組成成份大部分已知，但還有一部分尚不清楚，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。其品質(zhì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。

高品質(zhì)的血清，應(yīng)通過各類嚴(yán)格的質(zhì)量檢測(cè)、各項(xiàng)指標(biāo)均應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)并能提供檢測(cè)報(bào)告。其中，微生物及病毒相關(guān)的檢測(cè)項(xiàng)目，均應(yīng)呈現(xiàn)“未檢出"。

Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清，不僅在微生物檢測(cè)指標(biāo)方面符合標(biāo)準(zhǔn)，內(nèi)毒素含量也很低，≤3EU/ml，澳洲血源，全程冷鏈運(yùn)輸，盡可能避免反復(fù)凍融的情況發(fā)生。

Round 3：監(jiān)控細(xì)胞狀態(tài)

在進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)期間，要密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物的污染跡象，對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)突變保持警惕（如培養(yǎng)基頻繁變色、細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢等）。在細(xì)胞復(fù)蘇、細(xì)胞凍存或者進(jìn)行其他關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)操作步驟前，如條件允許，建議對(duì)細(xì)胞進(jìn)行取樣，進(jìn)行支原體檢測(cè)，包括常規(guī)PCR和qPCR等方法，方便快捷。

如果需要進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，則推薦使用Venor®GeM qEP支原體qPCR檢測(cè)試劑盒。配合Venor®GeM Sample Preparation支原體DNA提取試劑盒以及支原體標(biāo)準(zhǔn)品一起使用，完成方法學(xué)驗(yàn)證。

Round 4：支原體祛除 

對(duì)于費(fèi)力擴(kuò)增的細(xì)胞（如已轉(zhuǎn)染，或經(jīng)過體外刺激），如果細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有支原體污染，但此細(xì)胞又不愿丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)，推薦使用MB公司生產(chǎn)的復(fù)合抗生素Zell Shield®。在每次使用Zell Shield®之前，細(xì)胞傳代時(shí)，先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細(xì)胞，再使用加了Zell Shield®的培養(yǎng)基養(yǎng)細(xì)胞，能達(dá)到更好的祛除支原體的效果。

非常珍貴的細(xì)胞或不易獲得的生物樣本，被支原體污染了，但需要挽救，不能丟棄， 例如：稀有的細(xì)胞種子。可采用支原體清除法。 若是可以培養(yǎng)超過一個(gè)月的細(xì)胞，則推薦使用德國(guó)MB公司的Mynox® Gold，直接殺除+鞏固防護(hù)兩步處理。

若是無法長(zhǎng)期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液，則推薦使用德國(guó)MB公司的Mynox® ，處理3小時(shí)，直接殺除。